{"id":7317,"date":"2019-12-05T13:06:20","date_gmt":"2019-12-05T15:06:20","guid":{"rendered":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/?page_id=7317"},"modified":"2019-12-05T13:08:30","modified_gmt":"2019-12-05T15:08:30","slug":"simone-dias-franco-ms","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/dissertacoesteses\/simone-dias-franco-ms\/","title":{"rendered":"Simone Dias Franco MS"},"content":{"rendered":"

\"faixapos6\"<\/a><\/h2>\n
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Simone Dias Franco<\/h2>\n
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Em 16 de abril de 2019, Simone Dias Franco, aluna de mestrado do programa de P\u00f3s-Gradua\u00e7\u00e3o em Biodiversidade Vegetal e Meio Ambiente do Instituto de Bot\u00e2nica \u2013 SP., bolsista CNPq, defendeu sua Disserta\u00e7\u00e3o de Mestrado intitulada, \u201cBidens segetum<\/em> Mart. Ex Colla: isolamento e identifica\u00e7\u00e3o dos poliacetilenos com atividade antif\u00fangica (g\u00eanero Cladosporium<\/em>) e polifen\u00f3is com atividade antioxidante do extrato etan\u00f3lico de folhas.\u201d<\/p>\n

A banca examinadora foi presidida pela sua orientadora, PqC. Dr.\u00aa Luce Maria Brand\u00e3o Torres e composta pela Prof.\u00aa Dr.\u00aa Fabiana Henriques Machado de Melo (FCMSCSP) e pela PqC. Dr.\u00aa Silvia Ribeiro de Souza (N\u00facleo de Pesquisa em Ecologia \u2013 IBt\/SP).<\/p>\n

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Bidens segetum<\/em> Mart. Ex Colla: isolamento e identifica\u00e7\u00e3o dos poliacetilenos com atividade antif\u00fangica (g\u00eanero Cladosporium<\/em>) e polifen\u00f3is com atividade antioxidante do extrato etan\u00f3lico de folhas<\/h3>\n
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ABSTRACT<\/strong><\/p>\n

Bidens segetum<\/em> Mart. ex Colla (Asteraceae) is popularly known as “pic\u00e3o do mato”, an herbaceous plant that occurs in the Cerrado biome of some Brazilian states. Bidens<\/em> species are used in folk medicine, many of which have already been studied. The activities attributed to these plants are related to secondary metabolites or natural products, which are synthesized to perform primary ecological functions, responsible for interactions with the environment, protection against ultraviolet rays (UV), pollination and may have their synthesis altered as a function of their characteristics environmental conditions. Among the secondary metabolites reported in the literature for the genus Bidens<\/em> are polyphenols and polyacetylenes. The objective of the present work was to isolate, purify and identify polyacetylenes with antifungal activity and polyphenols with antioxidant activity from the fractions obtained from B. segetum<\/em> ethanolic extract. The fresh leaves were collected from B. segetum<\/em> specimens grown at the N\u00facleo de Pesquisa de Fisiologia e Bioqu\u00edmica from Instituto de Bot\u00e2nica de S\u00e3o Paulo, SP (IBt, SP). The leaves were weighed, frozen, lyophilized, crushed and macerated with ethanol (93\u00b0) for three days to obtain crude extract (EEBs). The monitored fractionation methods were performed with EEBs. The former by exclusion chromatography (Sephadex LH-20) on an open top column and gradient with the eluents hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), methanol (MeOH) and H2<\/sub>O and the second by liquid-funnel partition glass, with Hex, AcOEt and H2<\/sub>O. The evaluation of antioxidant potential was based on the qualitative assay on CCD, silica gel and quercetin as standard and quantitative on microplate and chlorogenic acid as standard, both using the DPPH free radical assay. To evaluate antifungal activity, CCD bioautographs were performed and the detection limit was determined with the filamentous fungi Cladosporium sphaerospermum<\/em> and Cladosporium cladosporioides<\/em> and nystatin as standard. To optimize the extraction method of polyacetylenes responsible for antifungal activity, extracts were obtained with frozen and lyophilized fresh leaves and dried leaves (60 \u00baC) by dichloromethane (DCM) and AcEOt immersions and the chromatographic profiles of the extracts (HPLC-DAD) showed whereas fresh, frozen and lyophilized leaves are a good matrix for the study of polyacetylenes present in the superficial part of the leaves. The phytochemical study was performed by CCD using class specific metabolite developers, especially for phenolic compounds such as flavonoids (NP – PEG), high performance liquid chromatography (HPLC) on analytical and semi-preparative scale and detection in the ultraviolet region (UV) and mass spectrometry (MS \/ MS), preparative layer (CCDP, silica gel) and open-top column chromatography using reverse phase (C18) and uni (1<\/sup>HNMR) and two-dimensional (HSQC, HMBC) nuclear magnetic resonance). The subfractions PP4 and PFFR3.3 were obtained from successive EEBs fractionations, CCDP purification and semi-preparative high-performance liquid chromatography and showed the best results for purity (HPLC-DAD) and activity in antifungal assays (Cladosporium<\/em>) and anti-radical (DPPH) respectively. Analysis data showed that the PFFR3.3 subfraction is rich in 5-CGA, similar to the standard (5-O-E-caffeoylquinic). For PP4 subfraction with antifungal activity (10 \u00b5g, C. sphaerospermum<\/em>), polyacetylenes (LC-DAD \/ MS \/ MS) were identified at retention times of Tr = 17.7 min (C22<\/sub>H26<\/sub>O8<\/sub>) at \/ z = 419 Da [M + H +] in glycosylated form and another at Tr = 22.6 min (C31<\/sub>H34<\/sub>O10<\/sub>) of m \/ z = 567 Da [M + H +] esterified with the 2-O-cafeoyl-2-methyl-D-erythonic acid derivative. PP4, PFFR3.3 and chlorogenic acid (5-CGA) at various concentrations were evaluated in in vitro<\/em> assays at different times (5, 15 and 30 min) with melanocyte cells (NGM) and radial growth melanoma strains. (Wm 1552), vertical growth (Wm 1366) and metastatic growth (Lu 1205) which quantify superoxide anion production based on the oxidation of DHE (dihydroethidium) probe molecule. The results showed that there was no decrease in superoxide anion (O2–<\/sup>) levels compared to control, that is, no inhibition of superoxide anion production was observed in melanocyte (NGM) cells and melanoma strains tested in PP4 subfractions. PFFR3.3 and 5-CGA standard.
\nKeywords: Asteraceae, Anti-radical activity, Antioxidant activity, Phenolic compounds, Polyacetylenes<\/p>\n

RESUMO<\/strong><\/p>\n

Bidens segetum<\/em> Mart. ex Colla (Asteraceae) \u00e9 popularmente conhecida como “pic\u00e3o do mato”, uma planta herb\u00e1cea que ocorre no bioma Cerrado de alguns estados brasileiros. As esp\u00e9cies de Bidens <\/em>s\u00e3o usadas na medicina popular, muitas das quais j\u00e1 foram estudadas. As atividades atribu\u00eddas a estas plantas est\u00e3o relacionadas aos metab\u00f3litos secund\u00e1rios ou produtos naturais, que s\u00e3o sintetizados para desempenhar fun\u00e7\u00f5es ecol\u00f3gicas prim\u00e1rias, respons\u00e1veis pelas intera\u00e7\u00f5es com o meio ambiente, prote\u00e7\u00e3o contra raios ultravioleta (UV), poliniza\u00e7\u00e3o e podem ter sua s\u00edntese alterada em fun\u00e7\u00e3o das condi\u00e7\u00f5es ambientais. Entre os metab\u00f3litos secund\u00e1rios, relatados na literatura para o g\u00eanero Bidens<\/em> est\u00e3o os polifen\u00f3is e os poliacetilenos. O objetivo do presente trabalho foi isolar, purificar e identificar os poliacetilenos com atividade antif\u00fangica e os polifen\u00f3is com atividade antioxidante das fra\u00e7\u00f5es obtidas do extrato etan\u00f3lico de B. segetum<\/em>. As folhas frescas foram coletadas de esp\u00e9cimes de B. segetum <\/em>cultivadas no N\u00facleo de Pesquisa em Fisiologia e Bioqu\u00edmica do Instituto de Bot\u00e2nica de S\u00e3o Paulo, SP (IBt, SP). As folhas foram pesadas, congeladas, liofilizadas, trituradas e maceradas com etanol (93o<\/sup>) por tr\u00eas dias, obtendo-se o extrato bruto (EEBs). Os m\u00e9todos de fracionamentos monitorados foram realizados com EEBs. O primeiro por cromatografia de exclus\u00e3o (Sephadex LH-20) em coluna de topo aberto e gradiente com os eluentes hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt), metanol (MeOH) e H2<\/sub>O e o segundo por parti\u00e7\u00e3o liqu\u00eddo-liqu\u00eddo em funil de vidro, com Hex, AcOEt e H2<\/sub>O. A avalia\u00e7\u00e3o do potencial antioxidante baseou-se no ensaio qualitativo em CCD, s\u00edlica gel e quercetina como padr\u00e3o e quantitativo em microplaca e \u00e1cido clorog\u00eanico como padr\u00e3o, ambos utilizando o ensaio do radical livre DPPH. Para avaliar a atividade antif\u00fangica foram realizadas bioautografias em CCD e a determina\u00e7\u00e3o do limite de detec\u00e7\u00e3o com os fungos filamentosos Cladosporium sphaerospermum<\/em> e Cladosporium cladosporioides<\/em> e nistatina como padr\u00e3o. Para otimizar o m\u00e9todo de extra\u00e7\u00e3o de poliacetilenos respons\u00e1veis pela atividade antif\u00fangica, extratos foram obtidos com folhas frescas congeladas e liofilizadas e folhas secas (60 \u00baC) por imers\u00f5es em diclorometano (DCM) e AcEOt e\u00a0 os perfis cromatogr\u00e1ficos dos extratos (HPLC-DAD) mostraram que folhas frescas, congeladas e liofilizadas constituem uma boa matriz para o estudo de poliacetilenos, presentes na parte superficial das folhas. O estudo fitoqu\u00edmico foi realizado por CCD utilizando reveladores espec\u00edficos para as classes de metab\u00f3litos, especialmente para compostos fen\u00f3licos, como flavonoides (NP – PEG), cromatografia l\u00edquida de alta efici\u00eancia (CLAE) em escala anal\u00edtica e semi-preparativa e detec\u00e7\u00e3o na regi\u00e3o do ultravioleta (UV) e espectrometria de massas (EM\/EM), cromatografia l\u00edquida em camada preparativa (CCDP, s\u00edlica gel) e em coluna de topo aberto usando fase reversa (C18) e resson\u00e2ncia magn\u00e9tica nuclear uni (1<\/sup>HNMR) e bidimensionais (HSQC, HMBC). As subfra\u00e7\u00f5es PP4 e PFFR3.3 foram obtidas dos sucessivos fracionamentos de EEBs, purifica\u00e7\u00e3o em CCDP e cromatografia l\u00edquida de alta efici\u00eancia em escala semi-preparativa e apresentaram os melhores resultados para grau de pureza (CLAE-DAD) e atividade em ensaios antif\u00fangicos (Cladosporium<\/em>) e anti-radicalar (DPPH) respectivamente. Os dados das an\u00e1lises mostraram que a subfra\u00e7\u00e3o PFFR3.3 \u00e9 rica em 5-CGA, similar ao padr\u00e3o (5-O-E-cafeoilqu\u00ednico). Para a subfra\u00e7\u00e3o PP4 com atividade antif\u00fangica (10 \u00b5g, C. sphaerospermum<\/em>), foram identificados poliacetilenos (LC-DAD\/EM\/EM) nos tempos de reten\u00e7\u00e3o de Tr=17.7 min (C22<\/sub>H26<\/sub>O8<\/sub>) e m\/z = 419 Da [M+H+] na forma glicosilada e outro no Tr=22.6 min\u00a0 (C31<\/sub>H34<\/sub>O10<\/sub>) de m\/z = 567 Da [M+H+]\u00a0 esterificado com o derivado do \u00e1cido 2-O-cafeoil-2-metil-D-erit\u00f4nico. A PP4, PFFR3.3 e o\u00a0 \u00e1cido clorog\u00eanico (5-CGA) em v\u00e1rias concentra\u00e7\u00f5es foram avaliados nos ensaios in vitro<\/em>, em diferentes tempos (5, 15 e 30 min) com\u00a0 c\u00e9lulas de melan\u00f3citos (NGM) e linhagens de melanoma de crescimento radial (Wm 1552), crescimento vertical (Wm 1366) e crescimento metast\u00e1tico (Lu 1205) que quantificam a produ\u00e7\u00e3o de \u00e2nion super\u00f3xido, com base na oxida\u00e7\u00e3o de DHE (dihidroet\u00eddio), mol\u00e9cula sonda. Os resultados mostraram que n\u00e3o houve diminui\u00e7\u00e3o dos n\u00edveis de \u00e2nion super\u00f3xido (O2–<\/sup>), em rela\u00e7\u00e3o ao controle, ou seja, n\u00e3o foi observado inibi\u00e7\u00e3o na produ\u00e7\u00e3o de \u00e2nion super\u00f3xido em c\u00e9lulas de melan\u00f3cito (NGM) e linhagens de melanoma testadas nas subfra\u00e7\u00f5es PP4, PFFR3.3 e padr\u00e3o 5-CGA.
\nPalavras-chave: Asteraceae, Atividade anti-radicalar, Atividade antioxidante, Compostos fen\u00f3licos, Poliacetilenos<\/p>\n

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\"pdf_grande\"<\/a>Simone Dias Franco<\/strong><\/a>
\nBidens segetum Mart. Ex Colla: isolamento e identifica\u00e7\u00e3o dos poliacetilenos com atividade antif\u00fangica (g\u00eanero Cladosporium) e polifen\u00f3is com atividade antioxidante do
\nextrato etan\u00f3lico de folhas<\/a><\/p>\n

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\u00a0VOLTAR AS DISSERTA\u00c7\u00d5ES E TESES<\/a><\/strong><\/p>\n

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Simone Dias Franco Em 16 de abril de 2019, Simone Dias Franco, aluna de mestrado do programa de P\u00f3s-Gradua\u00e7\u00e3o em Biodiversidade Vegetal e Meio Ambiente do Instituto de Bot\u00e2nica \u2013 SP., bolsista CNPq, defendeu sua Disserta\u00e7\u00e3o de Mestrado intitulada, \u201cBidens segetum Mart. Ex Colla: isolamento e identifica\u00e7\u00e3o dos poliacetilenos com atividade antif\u00fangica (g\u00eanero Cladosporium) e […]<\/p>\n","protected":false},"author":103,"featured_media":0,"parent":249,"menu_order":0,"comment_status":"closed","ping_status":"closed","template":"","meta":[],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/7317"}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/pages"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/types\/page"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/users\/103"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=7317"}],"version-history":[{"count":2,"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/7317\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":7321,"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/7317\/revisions\/7321"}],"up":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/pages\/249"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.infraestruturameioambiente.sp.gov.br\/pgibt\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=7317"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}